轉染試劑的作用原理是什么,有哪些轉染方法?
2021-01-26 4223
轉染試劑通過納米技術合成，通過物理作用與核酸結合，濃縮包裹核酸，從而保護核酸免受免疫系統破壞，同時增強核酸進入細胞核中表達。不含任何動物來源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應，不影響動物和器官組織的功能，可以多次在同一動物注射。
隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。轉染試劑能做到高達90%的轉染效率，轉染時不需要去除血清，對細胞損傷較小，對貼壁細胞和懸浮細胞均適用。
轉染根據是否能把外源核酸整合到宿主染色體上分為瞬時轉染和穩定轉染。
瞬時轉染：外源性DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一次宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但是通常只能維持幾天，多用于啟動子以及其他調控元件的分析。一般在24-96小時內分析結果。核酸類型比較廣泛，質粒DNA、siRNA、miRNA、和mRNA都可進行瞬時轉染。
穩定轉染：通過這種轉染方式外源性DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。外源DNA整合到宿主染色體中概率很小，大約1/10000轉染細胞能整合，通常需要通過轉染試劑來做選擇性標記，得到穩定轉染的同源細胞系。穩定轉染的核酸多為質粒DNA。
